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無外泌體胎牛血清 FBS050-EXO

更新時(shí)間:2025-04-21點(diǎn)擊次數(shù):397

無外泌體胎牛血清 FBS050-EXO

名稱:無外泌體胎牛血清

貨號(hào): FBS050-EXO

規(guī)格:50ML

品牌:WINSERA

 

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無外泌體血清產(chǎn)品應(yīng)用:

大多數(shù)細(xì)胞的生長所需的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基,都需要添加胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)作為其生長所需補(bǔ)充物。但是,F(xiàn)BS 來源于牛血清,其中天然含有大量的包括外泌體(exosome)在內(nèi)的外源性細(xì)胞外囊泡(extracellular vesicles)。exosome 其內(nèi)含有的蛋白質(zhì)與核酸分子包括 mRNA、miRNA、rRNA 和 snoRNA 等,exosome 所含成份與其細(xì)胞來源密切相關(guān),這也決定了 exosome 的功能特異性。但是,F(xiàn)BS 相關(guān)的 RNA 會(huì)在分離細(xì)胞外膜泡 RNA(exRNA)時(shí)一同被分離出來,這會(huì)對(duì)下游 RNA 分析造成干擾。因此,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)過程中采取減少 FBS 源 RNA 干擾的預(yù)防措施是非常必要的。

無外泌體血清適用外泌體研究。

 

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外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。為細(xì)胞間通訊的重要媒介,它像一個(gè)信使,為細(xì)胞與胞外環(huán)境傳遞信息,保障機(jī)體的正常工作。

外泌體的分離方法這么多,選擇哪種更好?

答:外泌體的分離純化一直是科研工作者關(guān)注的問題,獲得高純度的外泌體對(duì)后續(xù)的研究至關(guān)重要。據(jù)了解,目前人們多采用超速離心、免疫磁珠、 超濾、 沉淀或試劑盒等方法實(shí)現(xiàn)外泌體的提取分離:

1、 超速離心法(差速離心)超離法是常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行( 如圖所示) ,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過程比較費(fèi)時(shí),且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),純度也受到質(zhì)疑;此外,重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量。

2、密度梯度離心在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在 1.13-1.19g/ml

的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時(shí)。

3、超濾離心由于外泌體是一個(gè)大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì),利用不同截留相對(duì)分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離,便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。

4、磁珠免疫法外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如 CD63、 CD9 蛋白),用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),但是效率低,外泌體生物活性易受 pH 和鹽濃度影響,不利于下游實(shí)驗(yàn),難以廣泛普及。

5、PEG-base 沉淀法聚乙二醇( PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多( 假陽性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機(jī)械力或者吐溫-20 等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等,因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑。

6、 試劑盒提取近幾年來,市場(chǎng)上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,有的是通過特殊設(shè)計(jì)的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化,也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。

 

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